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正確的洗板操作對(duì)于降低ELISA實(shí)驗(yàn)中的變異和消除背景干擾至關(guān)重要。如果您正在使用自動(dòng)化洗板設(shè)備或?qū)嶒?yàn)結(jié)果的變異程度高于預(yù)期,希望以下文章和視頻能幫助您優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果回歸正常。
手動(dòng)洗板的優(yōu)點(diǎn)
雖然ELISA洗板的目的是去除未結(jié)合的反應(yīng)物,但過(guò)度洗板會(huì)不同程度上導(dǎo)致抗體與目標(biāo)蛋白解離,從而導(dǎo)致吸光值偏低和%CV值偏高。此外,殘留液體去除不完全(通常發(fā)生在自動(dòng)洗板設(shè)備中)也會(huì)導(dǎo)致更高的檢測(cè)背景,這些對(duì)HCP ELISAs檢測(cè)尤為不利,因?yàn)?/span>其本身就具有較高的基線吸光值。
因此,Cygnus專家建議在使用Cygnus ELISA試劑盒時(shí)盡量采用手動(dòng)洗板的方法。該方法簡(jiǎn)便易學(xué),無(wú)需任何特殊設(shè)備。只要準(zhǔn)備一些低纖維吸水紙和一個(gè)洗瓶就可輕松操作,需要注意的是洗瓶的出水口要修剪成大開(kāi)口斜面以確保洗液的充分流動(dòng)與合適的沖洗力度。
修剪洗瓶出水口
準(zhǔn)備工作:稀釋洗滌液并準(zhǔn)備好洗板操作區(qū)域
用蒸餾水將20×的濃縮洗滌液稀釋至1×洗滌液裝入洗瓶?jī)?nèi),將吸水紙鋪開(kāi)放在水槽旁邊干凈的工作臺(tái)上。
注:請(qǐng)勿使用除ELISA試劑盒提供之外的其他洗滌液,這樣可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
第一步:倒出ELISA孔板內(nèi)的液體
用拇指按住ELISA板一側(cè)的中間位置,用食指按住另一側(cè),從底部托起ELISA板??梢杂媚粗负褪持缚圩?/span>孔板條或板條兩端的標(biāo)簽,以避免板條從板托中掉出。在水槽上方迅速翻轉(zhuǎn)孔板,借助手臂的力量快速向下移動(dòng)并突然停止,動(dòng)作要連貫,讓液體借助慣性從孔板內(nèi)甩入水槽。在操作正確的情況下,手指、孔板條和板托外側(cè)不應(yīng)沾上任何液體。然后重復(fù)這個(gè)傾倒動(dòng)作一次。
注:如果擔(dān)心孔板條從板托中掉出,可以在每個(gè)孔板條上提前標(biāo)注好位置。
第二步:用吸水紙吸干殘留液體,然后輕輕拍板
立即將倒扣的孔板按壓在吸水紙上,并將孔板移至吸水紙未使用的區(qū)域,輕輕拍板三次,每一次拍板都要在吸水紙未使用的區(qū)域。不要用力拍板,如果拍板力度過(guò)大會(huì)在板上傳遞不均勻的沖擊能量,致使抗體/分析物復(fù)合物的解離。
第三步:清洗孔板
用裝有1×洗滌液的洗瓶,從板的上邊一側(cè)開(kāi)始,將洗滌液逐個(gè)填滿所有孔到溢出,直至最后一個(gè)孔,然后再按照步驟1和2的方法丟棄洗滌液并輕輕拍板。
注:不用擔(dān)心洗滌液從孔內(nèi)溢出,但要避免洗滌液在孔內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間浸泡。
重復(fù)上述步驟3次,總共進(jìn)行4次洗板操作。需要注意的是,在第2次和第4次洗板時(shí),要從板的下邊一側(cè)反方向逐孔加入洗滌液。這樣操作可以確保所有孔的洗滌液總浸泡時(shí)間基本相同。另外,無(wú)需額外增加洗板次數(shù),這樣可能會(huì)使結(jié)合在抗體上的分析物解離,導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度降低。
最后一次洗板后,還是按照步驟1和2所述的方法吸干/輕拍吸水紙。然后將ELISA板倒扣在吸水紙上靜置約20秒,以便徹底排干殘留液體,最后再在吸水紙上拍板4次。
注:每次拍板后,孔板最好能在手中水平旋轉(zhuǎn)180度,這樣可以確保板兩端的受力更加均勻。
第四步:擦干多余液體
用干凈的吸水紙擦拭孔板的底部外部,清除殘留的洗滌液。最后將洗好的ELISA板放回到實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)并加入底物。
注:不要讓孔板徹底晾干,否則酶的活性將會(huì)受到影響。底物要遠(yuǎn)離水槽,因?yàn)橄窗暹^(guò)程可能會(huì)產(chǎn)生氣溶膠,導(dǎo)致孔板或者底物被污染,影響檢測(cè)結(jié)果。
最后,請(qǐng)觀看以下洗板操作視頻,幫助您快速掌握這一精確的技術(shù)!
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Cygnus Technologies, LLC.為生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法,旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒,用于檢測(cè)超過(guò)50種不同表達(dá)系統(tǒng)的特異性雜質(zhì)。Cygnus作為專注于生物技術(shù)應(yīng)用免疫檢測(cè)的高靈敏度分析技術(shù)的專家,Cygnus的產(chǎn)品和服務(wù)已經(jīng)被幾乎所有主要的生物制藥公司使用超過(guò)25年。
北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國(guó)總代理,與國(guó)內(nèi)眾多知名藥企,CRO/CMO企業(yè)建立了長(zhǎng)久穩(wěn)定的合作關(guān)系。多年來(lái)西美杰的產(chǎn)品及服務(wù)幫助許多企業(yè)加速R&D階段,提高藥物質(zhì)量、純度和安全,加速優(yōu)化研發(fā)工藝,減少產(chǎn)品上市時(shí)間,降低QC成本。如您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣,歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.sctyh.cn了解更多信息。