核酸染料是分子生物學實驗中不可或缺的試劑,其中溴化乙錠(EtBr)因其高靈敏度,長期以來一直被用作核酸染色的標準染料。但是EtBr具有潛在的誘變和致癌作用,EtBr能與DNA嵌合,引起細胞突變,長期接觸可能對人體健康產生負面影響。NIPPON GENETICS推出的新型MIDORIGreen系列核酸染料,是一種非致癌性和非致突變性的染料,無法穿透乳膠手套和細胞膜。同時致突變性試驗(Ames試驗)和細胞毒性試驗均為陰性,因此是一種高安全度的核酸染料[1]。
紫外光與EtBr染色至今仍一起被用于分子生物學實驗室中檢測核酸。然而紫外光譜會導致DNA樣品的修飾和降解,30秒的紫外線曝光足以大幅降低克隆效率。藍/綠LED在470 nm - 520 nm處發(fā)出安全可見光,這種光譜對 DNA 沒有破壞性,與紫外光相比,DNA完整性和克隆/測序效率完全不受影響,即使在長時間的光照下也是如此。MIDORIGreen系列核酸染料經過優(yōu)化,可在紫外光或藍/綠光激發(fā)時獲得更亮的信號,同時也兼容紫外光。
圖1:EtBr和MIDORIGreen吸收光譜對比
MIDORIGreen產品特點
? 出色的信號質量
? 用于凝膠內染色和后染色的安全核酸染料
? 溴化乙錠的安全替代品:非致癌無毒
? 適用dsDNA、ssDNA或RNA染色
? 膠染法和泡染法均可
MIDORIGreen Advance
MIDORIGreen Advance靈敏度與EtBr相當,可以直接添加到熔融的瓊脂糖中。同時兼容紫外線或藍/綠LED,因此無需更改原有的實驗步驟。MIDORIGreen Advance的稀釋倍數可高達1:25000。100 mL瓊脂糖凝膠只需4μL至6μL,每1mL的染料可配置約17L至25L瓊脂糖凝膠。
MIDORIGreen Direct
MIDORIGreen Direct中已經包含10X Loading Buffer,可以直接添加到核酸樣品中,無需將其或任何其他染料添加到凝膠基質。相較于在凝膠中添加染料的染色方式,核酸的直接染色消除了背景染色,提供了完美的信噪比。1 mL的 MIDORIGreen Direct足夠提供1,000至2,000個樣品的染色。
MIDORIGreen Direct可以為下游提供更好的結果。
從瓊脂糖凝膠中分離核酸可以進一步下游應用,許多染料,如EtBr甚至SYBR? Green,由于其嵌入特性,都是強酶抑制劑。而MIDORI Green 染料與 DNA 骨架結合的方式能為下游應用帶來更高的效率,包括克隆、測序、PCR等。[2]
MIDORIGreen Xtra是NIPPON GENETIC最新一代核酸染料,針對藍/綠LED和藍LED光源進行了優(yōu)化,可以在瓊脂糖凝膠中產生強熒光信號。同時MIDORIGreen Xtra不會對瓊脂糖凝膠進行染色,因而具有很低的背景噪音,從而獲得出色的信噪比。由于非常低的背景熒光,這使得識別少量 DNA 變得非常容易,因此MIDORIGreen Xtra具有超高靈敏度。
圖3:使用MIDORI Green Xtra檢測的DNA條帶具有超高靈敏度(注:左圖使用藍色/綠色 LED 透射儀進行檢測;右圖使用藍色LED透射儀進行檢測。)
MIDORIGreen easy
MIDORIGreen easy具有與MIDORIGreen Xtra相同的出色信號質量和低背景,擁有比EtBr更好的信號,MIDORIGreen easy的開發(fā)是為了可以輕松替換SYBR®safe,同時染色方案不需要改變。MIDORIGreen Easy的稀釋倍數可高達1:10000,100 mL瓊脂糖凝膠只需8μL至10μL。
圖4:MIDORIGreen easy(左)與MIDORIGreen Xtra(右)使用藍/綠 LED 激發(fā)燈。
MIDORIGreen系列檢測光譜與靈敏度
產品 |
藍/綠LED |
藍LED |
UV-Light |
靈敏度 |
MIDORIGreen Advance |
√ |
√ |
? |
+ |
MIDORIGreen Direct |
√ |
√ |
? |
+ + |
MIDORIGreen Xtra |
√ |
√ |
? |
+ + + |
MIDORIGreen Easy |
√ |
√ |
√ |
+ + |
注: √表示兼容;?表示兼容但不推薦;
MIDORIGreen核酸染料系列產品列表
貨號 |
品名 |
規(guī)格 |
MG04 |
MIDORIGreen Advance |
|
MG06 |
MIDORIGreen Direct (含loading buffer) |
1 ml (10x conc. -可直接添加樣品) |
MG10 |
MIDORIGreen Xtra |
1 ml (25.000x -可染色25L凝膠) |
MG12 |
MIDORIGreen Easy |
0.4 ml (10.000x -可染色4L凝膠) |
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