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DENARASE® High Salt 是一種經(jīng)過生物工程改造的野生型 Serratia marcescens 內(nèi)切酶,通常用于生物工藝中的 DNA 去除。與野生型 DENARASE® 相比,該酶的幾個(gè)氨基酸被替換以提高其耐鹽性,而不會(huì)失去其對(duì)核酸的特異性。DENARASE® High Salt 在更廣泛的鹽濃度和 pH 范圍內(nèi)保持更高的活性,為客戶提供了更大的工藝靈活性,同時(shí)為病毒載體制造工藝提升成本效益,尤其是在需要較高鹽濃度的條件下。由于與野生型核酸內(nèi)切酶具有很高的相似性,DENARASE® High Salt 可以使用與野生型酶相同的核酸內(nèi)切酶 ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè),例如DENARASE® ELISA試劑盒,Cygnus核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)試劑盒(EonucleaseGTP ELISA,貨號(hào)F960)。
DENARASE® High Salt的生產(chǎn)采用c-LEcta成熟的專利DENARASE®生產(chǎn)工藝,該工藝采用革蘭氏陽性芽孢桿菌菌株(Bacillus.sp.)表達(dá),大大降低了內(nèi)毒素殘留風(fēng)險(xiǎn)。該酶按照ISO 9001標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),不使用抗生素和動(dòng)物源性原料或TSE/BSE風(fēng)險(xiǎn)原料。
DENARASE® High Salt酶特性
DENARASE® High Salt是專為在更高、與工藝相關(guān)的鹽濃度下實(shí)現(xiàn)DNA清除活性而設(shè)計(jì)的。該工程酶在0-500 mM一價(jià)陽離子濃度范圍內(nèi)具有活性(見圖1)。
圖1. NaCl對(duì)酶活性影響
鎂離子(Mg2+)是確保DENARASE® High Salt發(fā)揮酶活性所必需的輔因子。DENARASE® High Salt在低鎂離子濃度(5-25 mM Mg2+)下具有基本活性,但在高鎂離子濃度(>25 mM Mg2+)下酶活性會(huì)降低。因此,在使用DENARASE® High Salt時(shí),應(yīng)確保鎂離子濃度在適當(dāng)范圍內(nèi)(見圖2)。
圖2. Mg2+對(duì)酶活性影響
DENARASE® High Salt質(zhì)量參數(shù)
DENARASE® High Salt產(chǎn)品為液體形式,配方為20 mM Tris-HCl(pH 7.4±0.2)、250 mM NaCl、5 mM MgCl2和50%(體積比)甘油。
項(xiàng)目 |
方法 |
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) |
產(chǎn)品性狀 |
直接觀測(cè) |
澄清透明液體 |
酶活性 |
光學(xué)測(cè)定1 |
>250 U/μL |
純度 |
SDS-PAGE和銀染 |
≥ 99% |
比活性 |
光學(xué)測(cè)定單位蛋白具有的酶活性即280 nm下44,600 L x mol-1 x cm-1的摩爾消光系數(shù) |
>5 x 105 U/mg |
內(nèi)毒素 |
LAL-Test,參考 Ph. Eur. 2.6.14, 方法C |
<0.25 EU/kU |
總菌落數(shù) |
TAMC/TYMC 參照 Ph. Eur. 2.6.12 |
需氧菌: < 5 cfu/200 μL 酵母: < 5 cfu/200 μL |
1. Unit定義: 每個(gè)活性單位 (U) 是指在37 °C ,pH 8.0 條件下,在30分鐘內(nèi)將鮭魚精DNA消化至相當(dāng)于ΔA260nm值為1.0 的酸溶性寡聚核苷酸。
DENARASE® High Salt產(chǎn)品參數(shù)
- 分子量: 27 kDa
- 最適pH: pH 7.4 - 9.0
- 最適反應(yīng)溫度:37 °C
- 等電點(diǎn)(pI):7.831
- 輔因子:Mg2+
DENARASE® High Salt訂購信息
品名 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
DENARASE High Salt 25 kU |
22002-25k |
25 kU |
DENARASE High Salt 100 kU |
22002-100k |
100 kU |
DENARASE High Salt 500 kU |
22002-500k |
500 kU |
DENARASE High Salt 1000 kU |
22002-1000k |
1000 kU |
DENARASE High Salt 5000 kU |
22002-5000k |
5000 kU |
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